Главной святыней храма Рождества Богоматери была икона Грузинской Богоматери XVII века, вклад ярославского
купца Григория Лыткина. Ярославцы сделали точный список с чудотворного образа из Черногорского монастыря на Пинеге под
Архангельском, обретённого в Персии в начале XVII века. Образ был "обложен жемчугом и окружён изображениями, относящимися к
обстоятельствам перенесения первоначальной иконы и чудесам, от неё бывшим". Еженедельно в субботу перед иконой читался
акафист Богоматери, а один раз в году - 22 августа - ей совершалось празднование.
В 1654 году горожане имели возможность ещё раз поклониться чудотворному образу - когда его проносили из
Черногорской обители в Москву для обложения новой ризой. Считается, что в Москве икона Грузинской Богоматери помогла
избавить её жителей от страшной моровой язвы.
Алтарь отделялся от храма высоким пятиярусным резным иконостасом, увенчанным
"довольно значительной велечины" крестом с изображением распятого Спасителя. Иконостас был реставрирован
в 1838 - 1849 годах на средства прихожан церкви купцов Чепахиных и Кузнецовых.